猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书

产品概述

产品名称：猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名称：Test Kit for Antibodies to Classical Swine Fever Virus (ELISA)

包装规格

96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

预期用途

猪瘟是由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus, CSFV）引起的一种高度传染性的疾病，具有出血性和致死性，表现为高热、广泛出血及坏死等症状。本试剂盒用于检测猪血清中的猪瘟病毒抗体，能够帮助评估猪瘟病毒疫苗的免疫效果。

原理

本试剂盒包含预包被猪瘟病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他相关试剂，采用酶联免疫法（ELISA）检测猪血清和血浆中的抗体。实验过程中，将对照血清和待检样本加入酶标板，若样品中含有抗体，则会与抗原结合，经过洗涤后，加入酶标记物形成特异性结合，最终通过显色反应测定样品中抗体含量。

试剂盒组成及存储

建议在2～8℃条件下保存，保质期为12个月。开封后的包被板需在避光条件下存放，避免受潮，且使用期限为2个月。

适用仪器

需配备能够测量450nm和630nm波长的酶标仪，以及37℃恒温设备和可调微量移液器。

样品准备

1. 采用常规方法从动物全血中制备清亮无溶血、无污染的血清，适合在2～8℃保存一周，长期则需冷冻保存于-20℃。
2. 用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（例如将5μl血清加入195μl稀释液中混匀），阴性和阳性对照无需稀释。
3. 使用之前，将浓缩洗涤液恢复至室温并稀释20倍作为工作洗涤液（如19份蒸馏水加1份浓缩洗涤液）。

检验方法

1. 使用前将试剂盒放置在室温下恢复30分钟。
2. 取所需酶标板条，设定阴性/阳性对照各2孔，其余板条应尽快密封并在2～8℃保存。
3. 在阴、阳性对照孔中分别加入100μl的对照液，样品孔加入稀释后的样品100μl，混匀后盖好覆盖膜，在37℃下避光反应30分钟。
4. 甩去孔内液体，加入350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次。
5. 每孔加入100μl酶标记物，盖好膜后在37℃避光反应30分钟。
6. 再次进行洗涤（参照步骤4）。
7. 在每孔中依次添加底物液A和底物液B各50μl，混匀后在37℃避光反应10分钟。
8. 加入50μl终止液，混匀后在450nm波长下测定各孔的吸光值。

参考值及结果判定

实验条件正常的情况下，阴性对照平均OD值应≤0.3，阳性对照平均OD值应≥0.6；
样品的OD值即为ODS，SP值计算公式为：SP值 = (ODS - ODNC) / (ODPC - ODNC)；
若SP值≥0.2，结果为阳性；若SP值＜0.2，结果为阴性。

试验方法的局限性

该试验主要用于定性检测猪血清、血浆中的猪瘟病毒抗体，依据SP值可以初步评估抗体水平的强度。

注意事项

1. 实验操作时请佩戴手套和工作服，确保执行严格的消毒和隔离措施，实验废弃物应按传染物处理。
2. 终止液具有腐蚀性，请避免与皮肤和衣物接触，如意外接触，请立即用大量自来水冲洗。
3. 酶标板需在恢复至室温后开封，未用完的板条需存放于干燥剂的密封袋中。
4. 浓缩洗涤液在低温下容易结晶，应在使用前恢复至室温，以确保完全溶解。
5. 洗涤时，每孔需加满液体，以确保游离酶被彻底洗净。
6. 检测用样品应保持新鲜。
7. 结果判定应依赖于酶标仪的读数。
8. 不同批号的试剂不得混用。

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